Konventionel søjlekromatografi
2.Chromatographic Column (rotationstype)
3.Chromatographic Column (Manual)
*** Prisliste for hele ovenfor, forhør os om at få
Beskrivelse
Tekniske parametre
Konventionel søjlekromatografianvender forskellen i distributionsforhold mellem forskellige stoffer mellem den stationære fase og den mobile fase eller de forskellige fastholdelseskapaciteter i faste faser i forhold til forskellige stoffer for at opnå stofparation. Når blandingen strømmer gennem den kromatografiske søjle med den mobile fase, vil den interagere med den stationære fase i søjlen (såsom opløsning, adsorption osv.). På grund af forskellene i fysiske og kemiske egenskaber og strukturer for hver komponent i blandingen, varierer størrelsen og styrken af deres interaktion med den stationære fase også. Under den samme drivkraft er retentionstiden for hver komponent i den stationære fase forskellig, så komponenterne i blandingen strømmer ud af søjlen i en bestemt rækkefølge og opnår adskillelse.
Parameter
Pesticidrest påvisning
 |
 |
 |
 |
Det siger vi ofteKonventionel søjlekromatografier faktisk søjlekromatografiseparation, også kendt som søjlekromatografi. Det blev først opfundet og brugt af russiske forskere i 1903. Det knuste en opløsning af plantepigmenter i calciumcarbonatpulver og fandt forskellige farvebånd på calciumcarbonatpulveret fra top til bund. Ved at adskille og udtrække forskellige farvebånd blev der opnået relativt ren chlorophyll, lutein osv..
Efter hundrede års udvikling er denne metode blevet relativt moden, og den stationære fase har også udviklet sig fra et enkelt calciumcarbonatpulver til aluminiumoxid (som kan opdeles i sure, neutrale, alkaliske), silicagel, aktiveret carbon osv. Blandt dem, er silicagel den mest anvendte i større laboratorier, generelt opdelt i normal fasesilica gel og omvendt fasesilica gel!
Den stationære fase (silicagel) skal generelt renses og aktiveres, og partikelstørrelsen skal være ensartet. I teorien, jo mindre partikelstørrelsen og jo større overfladeareal pr. Enhedsmasse, jo højere er adsorptionskapaciteten og jo bedre separationseffekten.
Imidlertid, når de faste fasepartikler er for små, er der ofte to situationer: den ene er, at de er lettere i vægt og let flyder i luften (silicagel kan ikke nedbrydes af den menneskelige krop, og jo finere, jo mere giftig er det); For det andet kan små partikler også føre til små huller mellem partikler, hvilket resulterer i en langsom opløsningsmiddelstrømningshastighed og tidsforbrug; At tage silikone som et eksempel er den største kommercielt anvendte størrelse af silikone i øjeblikket 200-300 mesh.
Med hensyn til kolonnepasningsmetoder, ud over det automatiske analyseudstyr, såsom præparationsforberedelse, effektiv flydende faseforberedelse og kolonnepasningsmaskiner, der er nævnt tidligere, er manuel kolonneoverførelse hovedsageligt opdelt i tre typer: atmosfærisk tryksøjle, der passerer, depressuriseringskolonne, der passerer og tryk på trykkolonne.
Blandt dem resulterer nedpressuriseringen gennem søjlen i dårlig adsorptionseffektivitet på grund af den hurtige strømningshastighed for elueringsmidlet, hvilket fører til tabet af det meste af antallet af bakker og dårlig separationseffektivitet. Det er velegnet til at adskille prøver med relativt åbne TLC -plader, især for prøver med kun en stor polær urenhed i produktet; Det meste af sin tid bruges på forbehandling af forbindelser, hvilket fjerner nogle urenheder inden omhyggelig oprensning. Det skal bemærkes, at opløsningsmiddel fordampning forårsaget af negativt tryk under brug kan føre til kondensation af et stort antal vanddråber på den ydre overflade af søjlen. Vandfølsomme forbindelser bør ikke let forsøges.
Atmosfærisk tryksøjle, der passerer, er den mest effektive separationsmetode blandt de tre, men fordi opløsningsmidlet ofte bevæger sig for langsomt, kan selv den bedste adskillelseseffekt påvirke effektiviteten. Derfor anvendes tryk normalt på dette tidspunkt, der kaldes undertrykkelseskolonne ved at passere; Men presset skal ikke være for højt. Generelt bruges en dobbeltkædekugle til manuel betjening, og en fiskepumpe bruges til automatisk drift. Begge kan ændres som vist på billedet.
Konventionel kolonneovergangsproces:
Forberedelsesarbejde skal udføres godt:
Når du vælger en kolonne, skal du observere, om der er et slibebræt. For søjler uden slibningsplader skal du huske at fylde bunden med noget bomuld. Bomuldet skal ikke være for tyk eller for tynd, så længe den kan blokere silikonen fra at komme af. (Bloggeren demonterede direkte et tøjbøjle og brugte det til at indsætte bomuld i stikkontakten på stikket)
Forbered den minimale polaritetseluent, UV -lampe (anbefalet til laboratoriepersonale, håndholdt, klar til at tage et foto til enhver tid), trykudstyr og reagensglasstativ efter behov!
Vælg en passende søjle, tilsæt silikongel, blød silikongelen og flad den ud
Valget afKonventionel søjlekromatografier meget vigtig, og deres størrelse skal beregnes baseret på produktmængden, som generelt kan opdeles i:
Et par milligram søjle (det endelige valg til total syntese);
En søjle med flere titusinder af milligram (metodologisk ekspansionssubstrat);
500 milligram til 1 gram søjle (ved hjælp af metodologi som råmateriale);
Søjler omkring 5 g og større skalaer.
Det mest almindelige forhold mellem søjddiameter og højde i laboratoriet er generelt mellem 1: 2,5 og 1:15. Mængden af silicagel, der blev anvendt som en stationær fase under prøvebelastning, er ca. 20 til 40 gange prøven. Standarden til valg af kolonner skal være baseret på TLC -pladeklatringssituationen i din prøve. Hvis der er mange urenheder i nærheden, kan du prøve at vælge en større kolonne så meget som muligt, så din prøve kan dækkes med et lille tyndt lag (anbefalet tykkelse under 5 mm). Hvis urenhederne er langt væk, kan denne tykkelse naturligvis øges, men det anbefales ikke, at tykkelsen på din prøve overstiger 2 cm, medmindre produktet simpelthen vaskes.
Mange mennesker begår en fejl ved at tro, at tilføjelse af mere silikone, selvom det er tykkere på min prøve, kan det adskilles godt? Dette svar er negativt!
Årsagen er, at disse mennesker aldrig troede, at prøverne nedenfor og over kørte ikke på samme linje, så de kun kunne få nogle rene, hvoraf de fleste blev krydset, for ikke at nævne uren, spildte tid og opløsningsmidler!
Det er også grunden til, at prøven kræver udtynding!
Efter valg af kolonnen kan tilsætning af silikone udføres gennem en fodringstragt. På samme tid skal du sørge for at bære en maske og betjene i en røghætte. Årsagen til dette vil ikke blive uddybet af bloggeren (silicose).
Hvad angår infiltration af silicagel, er den anbefalede proces: For det første skal du placere silicagelkolonnen med silicagelen installeret lodret, flade overfladen af silicagelen med din hånd, tilslut bunden af silicagelkolonnen til en vandpumpe, pumpe ud silicagelen og hæld derefter den mindst polære eluent ovenfra. Når elueringsmidlet er ved at lække ud, skal du lukke lukningsventilen for at forhindre opløsningsmiddel i at blive pumpet ind i vandpumpen.
Derefter kan silikongelen under tryk være ensartet gennemvædet af skylning af syv eller otte kolonnevolumener med den mindste mængde udviklingsmiddel.
Prøve ovenfor
Prøveudtagning er opdelt i våd prøveudtagning og tør prøveudtagning.
(1) Våd prøveudtagning.
Den anbefalede metode er at bruge en pipette med en gummitip til at suge prøven, tæt på den øverste del af silikonegelen, langsomt og jævnt dryppe prøven, indtil den dækker et lag, og hold derefter op med at tilføje prøven og anvende noget tryk for at fordybe det fedtede stof i silikonegellaget; Dyber det olieagtige stof i silikonelaget, og gentag denne proces flere gange, indtil alle prøver er indlæst!
Nogle nye studerende kan være nysgerrige, hvorfor denne operation udføres i stedet for at belægge den våde procesolie som stof på én gang?
Faktisk kan denne operation reducere prøvelagets effektive højde. På dette tidspunkt er søjlekromatografi allerede begyndt, og de efterfølgende prøver er som opløsningsmidler, der skubber de tidligere prøver til adsorber og desorberer i silicagel.
(2) hvad angår tør prøveudtagning.
Medmindre det er absolut nødvendigt, anbefales det ikke. Faste prøver anbefales mere at blive slået eller krystalliseret. "Skruppelløse metoder, ethylacetat vs. vand, ultralydsoscillation assisteret krystallisation af høj kogende olie" og "at dele en laboratorie -omkrystallisationsmetode" anbefales.
Tørprøveudtagning bringer generelt to problemer; På den ene side, under prøveblandingsprocessen, stiger muligheden for reaktion mellem prøven og silicagelen på grund af behovet for at hæve temperaturen til roterende fordampning; På den anden side betyder tørbelastning, at adsorbenter vil blive indført i prøvelaget, hvilket øger prøvelagets højde eller størrelsen på søjlen, hvilket kræver mere tid og mere opløsningsmiddel.
Hvis der ikke er noget andet valg, skal du blot hælde det adsorberede pulver langsomt i kolonnen til belastning, med nogle krav, der ligner våde metoder.
Tilsæt vandfrit natriumsulfat eller kvartssand
For at undgå at påvirke prøvelaget under tilsætning af elueringsmiddel, forårsage ujævnhed, deformation og påvirke separationseffektivitet, lægges et lag vandfri natriumsulfat eller kvartsand generelt lagt på toppen af prøvelaget.
Vores ingeniører foretrækker personligt at lægge vandfrit natriumsulfat, fordi det også har en tørringsfunktion og er venlig til opløsningsmidler såsom dichlormethan, som er tilbøjelige til flygtigisering, varmeabsorption og kondens!
Gradienteluering, prøveudtagning og indsamling
Efter belastning skyller først søjlen med et lille polært opløsningsmiddel (et opløsningsmiddel, der ikke tillader produktet at passere) for 2-3 kolonnevolumener (en søjlevolumen er defineret som volumenet af den mobile fase, der flyder ind og ud) for at sikre ensartethed og derefter vælge en andel til eluering.
Hvordan vælger jeg det elueringsmiddel, der passerer gennem søjlen?
Forholdet mellem eluering er forholdet, når dit produkt når en RF -værdi på ca. 0. 2 på TLC -pladen
Dette er oplevelsen af søjlevask, som jeg har læst mange bøger og delt, og den faktiske proces er også meget ens. Personligt foretrækker jeg at reducere gradienten med to gange.
For eksempel, hvis opløsningsmidlet til TLC -pladeklatring er PE/EA =2: 1, er bloggeren mere tilbøjelig til at starte gradienteluering fra PE/EA =4: 1 og slutter ved PE/EA =2: 1, hvilket generelt resulterer i bedre resultater.
Der er også teknikker, når man indsamler elueringsmiddel. Du kan først vælge et større reagensglas for at modtage det, og når TLC nærmer sig målpunktet, skal du skifte til et mindre reagensglas. Dette kan reducere muligheden for at modtage mere og undgå urenheder.
Hvis du støder på situationer, hvor urenhedspunkter og produktpoint er tæt på hinanden, især dem med svag fluorescens, skal du huske ikke at anvende pres. Vælg i stedet at passere kolonnen under normalt tryk, og skift røret hver gang halvdelen eller mindre rør er tilsluttet, hvilket også kan øge renselsessandsynligheden.
Husk ikke at håndtere søjlen rettidigt!
Mange mennesker har en vane med at antage, at kolonnen er blevet passeret og tørret, når der ikke er noget produkt i et eller to rør efter TLC i det senere tidspunkt.
Jeg indså kun, at udbyttet var for lavt, da jeg beregnet det, eller da jeg gik for at lave et spektrum, fandt jeg, at spektret var forkert og gik glip af det forkerte punkt. Jeg beklagede det dybt.
Så det anbefales, at du ikke skynder dig at behandle kolonnen efter at have afsluttet det ønskede punkt. Udfør i stedet nuklear magnetisk resonans for at matche udbyttet før behandlingen.
Hvis du har travlt eller har travlt med at rense andre forbindelser med detteKonventionel søjlekromatografi, det anbefales at skylle med en godartet solvent med høj polaritet blandet opløsningsmiddel og forlade denne del af elueringsmidlet separat for identifikationsresultater.
Populære tags: Konventionel søjlekromatografi, Kinas konventionelle søjlekromatografiproducenter, leverandører, fabrik
Et par af
Lille kromatografikolonneSend forespørgsel
